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生化實驗室常用儀器操作一覽

[2011/7/13]

  【冷凍真空干燥機】

  基本原理

  高真空狀態(tài)下,利用升華原理使預(yù)先凍結(jié)的物料中的水份直接從冰態(tài)升華為水蒸汽而被除去,從而使物料干燥。真空冷凍干燥廣泛應(yīng)用于多種產(chǎn)品,可確保物品中蛋白質(zhì)、維生素等各種營養(yǎng)成份,特別是那些易揮發(fā)熱敏性成份不損失,因而能最大限度地保持原有的營養(yǎng)成份。還能有效防止干燥過程中的氧化,可以避免營養(yǎng)成份的轉(zhuǎn)化和狀態(tài)變化。凍干制品呈海綿狀、無干縮、復(fù)水性好、含水份極少,相應(yīng)包裝后可在常溫下長時間保存和運輸。

  操作步驟

  1、系統(tǒng)準備

  檢查系統(tǒng)是否清潔和干燥,真空泵與冷凍機是否連接,接通電源,檢查排氣口、冷凍管的密封性。

  2、加樣

  樣品需要預(yù)冷到至少-40℃,可以在深低溫冰箱(-70℃)或者液氮(-196℃)中進行。打開密封管開關(guān),搬開冷凍艙,將樣品置于冷凍艙里的隔板上。關(guān)閉密封管開關(guān)。

  3、冷凍

  打開冷凍開關(guān),等待20~30分鐘,直到冷凍艙的溫度低于-40℃。

  4、抽真空

  打開真空泵開關(guān),等待10~15分鐘,直到系統(tǒng)壓力低于100 millitorr。

  5、監(jiān)控過程

  確保系統(tǒng)參數(shù)(冷凍溫度、真空壓力)在正常范圍內(nèi);

  定期檢查冷凍艙中的結(jié)冰情況,決定是否要除霜;

  觀察樣品是否干燥完全,一般干燥過程需要24~72小時,視具體樣品通過目測而定。

  6、關(guān)閉系統(tǒng)

  關(guān)閉總開關(guān),接上排氣管或打開密封管開關(guān)以解除真空狀態(tài)。

  關(guān)閉真空開關(guān),關(guān)閉冷凍開關(guān),取出樣品。

  7、系統(tǒng)維護

  除霜:冷凍艙下面的壓縮艙內(nèi)如果有霜,則接上排水管,然后用少量熱水(不能超過壓縮艙容積的一半)促進冰霜的融化。不能通過敲擊冰塊來除霜。

  除濕:壓縮艙、冷凍艙、真空泵壓縮機以及墊圈等表面的水霧均需擦干。

  清潔:壓縮艙、冷凍艙可以用溫和的去污劑或蘇打水來清洗,然后干燥并撤去排水管,并重新密封排水孔。

  泵油:定期檢查油位,排除油霧。

  注意事項

  1、樣品要保持冷凍,不能“回融”。

  大多數(shù)溶劑的冰點高于-40℃,所以冷凍艙溫度低于-40℃可以使一般樣品保持冰態(tài)。

  為確保樣品不“回融”,可將冰凍的樣品制成小于20 mm的小塊。

  2、有毒或有腐蝕性的樣品。

  最好不要用來冷凍干燥,如果一定要用,則更加需要系統(tǒng)維護,并需要另外定購特定的濾器以保護真空泵。

  3、真空泵油需保持干凈。

  微黃或無色的油是干凈的,顏色變深表示有酸污染,霧狀渾濁表示有水污染。有污染時需要更換好油。

  【自動雙重蒸餾水器】

  操作說明

  1.擰開自來水龍頭,讓水流開始較為細小,觀察第一管水位超過石英加熱管;

  2. 接通電源,按下第一管的ON開關(guān),這時水速仍以細小為主,等待第一管內(nèi)自來水沸騰,這時候?qū)⑺髦饾u調(diào)大至適中程度;

  3. 等待第二管內(nèi)自來水超過石英加熱管,按下第二管的ON開關(guān),第二管隨即加熱,注意觀察兩個管子的水位變化,及時做出調(diào)整。

  4.一般來說有下面三種情況:

  a→第一管水位過高,接近水蒸氣散出口,這時宜將調(diào)整水位的橡膠管放置低于玻璃管位置,待自來水流出至適當位置,將橡膠管回復(fù)原位;

  b→第一管水位過低,調(diào)整自來水龍頭加大進水,或者調(diào)節(jié)橡膠管上控制開關(guān)加大進水,乃至關(guān)閉電源待進水到適當位置,重新打開電源,繼續(xù)蒸餾。

  C→第二管水位過低,按下第二管的OFF開關(guān),待水位升高超過石英加熱管時再開始蒸餾。

  5. 雙蒸結(jié)束,先關(guān)閉控制面板上OFF兩個電源,然后關(guān)自來水龍頭。

  【高壓鍋】

  操作程序

  1.打開鍋蓋,倒入蒸餾水,滿至WATER LEVEL,以后每次使用時,必須補足水滿到WATER LEVEL。

  2.把插頭插上電源,按電源開關(guān)ON,顯示器指示燈亮起,機器開始進行程序自檢。

  3.按顯示屏的提示輸入工作密碼。

  4.放置待滅菌的物品入滅菌室,并旋緊鍋蓋。

  5.根據(jù)所高壓物品的不同,按過程選擇鍵1-6中的某一數(shù)字選擇不同的滅菌流程。一般固體滅菌選擇按鍵4,液體滅菌選擇按鍵5。特殊要求的,可以先按下MODE鍵,輸入工作密碼。選擇要重新設(shè)置的項目進行修改。

  6.按啟動鍵START鍵,即開始此滅菌模式。

  NOTE:須待機器進入正常運行程序后,人方可離開。

  7.當滅菌流程結(jié)束時,響鈴鳴叫30秒。

  8.確認壓力顯示器的壓力降為0以后,把鍋門把手旋松,讓殘余蒸氣釋出,待5-10分鐘后推開跨桿,準備取出滅菌物品。如需高壓另一鍋,則需重新加水滿到WATER LEVEL,同時處理廢水收集瓶中的廢水。

  9.在高壓鍋使用記錄上進行登記。

  【離心機】

  操作步驟:

  1、將離心機打開,儀器此時的工作狀態(tài)為最后操作設(shè)置的參數(shù)。

  2、平衡離心管,兩兩對稱放入離心機。

  3、蓋好離心蓋,蓋子鎖上時才能離心。

  4、選擇操作模式:

  設(shè)置參數(shù):1)離心速度:300rpm~14000rpm;2)離心時間:1min~99min;

  3)離心溫度:-10℃~40℃;4)最低加速度:1~5個,1最慢

  5)最低減速度:0~4 coast-down,(0是慣性)

  (1)手工模式:不重新設(shè)置時,按上次設(shè)置的參數(shù)離心,可以重新設(shè)置參數(shù)離心。

  (2)程序模式:可預(yù)先設(shè)置5個程序儲存,不同的程序按不同的序號,相應(yīng)的指示燈亮,再按另外的序號可以選另外的程序。

  (3)瞬時(MOM)操作模式:持續(xù)按MOM鍵,可使離心達到最大速度和最大加速度,當放開時離心減慢直到停止,離心時顯示的時間是已經(jīng)用了的時間(以秒計數(shù))。

  5、按START鍵,開始離心,綠燈亮。此時顯示實際的離心速度和溫度,時間為剩余時間。

  6、當設(shè)置時間到,離心機通過制動裝置自動停止離心,黃燈亮,可以打開離心蓋。

  如何設(shè)置相應(yīng)參數(shù)?

  1、用”key-programe”取消錯選的程序。

  2、用“SOFT ACL”鍵設(shè)置加速度:高加速燈滅,低加速燈亮;按住鍵3秒,燈閃爍,用設(shè)置離心速度的鍵選擇1~5

  3、用“SOFT DCL”鍵設(shè)置加速度:高減速燈滅,低減速燈亮;按住鍵3秒,燈閃爍,用設(shè)置離心速度的鍵選擇0~4

  4、設(shè)置離心溫度、速度和時間:當“SET”燈閃爍時,可以改變參數(shù),用箭頭鍵選擇。設(shè)置后3秒,燈停止閃爍,自動確認。

  如何記憶一個程序?

  1、在設(shè)置的參數(shù)閃爍時,按程序鍵1~5,當程序鍵旁的燈亮時,參數(shù)被儲存。

  2、保護程序不被修改:可以在參數(shù)閃爍時,按一個程序鍵的同時按下“LOCK PROG(STOP)”鍵。取消保護時再次按程序鍵同時按下“LOCK PROG(STOP)”鍵。

  警告信息:

  1、END:在每次離心循環(huán)結(jié)束時顯示,在進行下一次操作時顯示設(shè)置得參數(shù)。

  2、LID:當離心開始而蓋子沒蓋緊時顯示,并報警。

  3、IMBAL:當離心物品不平衡時顯示,并報警。

  4、MAIMS:當動力系統(tǒng)出錯時顯示。

  5、OVERT:當離心室里的溫度>45℃時顯示。

  6、SET:當設(shè)置速度大于最大離心速度時顯示。

  注意事項:

  1、離心時不要移動或轉(zhuǎn)動儀器。

  2、不要使用說明書不允許使用的轉(zhuǎn)子和附屬物。

  3、不能超過最大轉(zhuǎn)速。

  4、不使用不適合離心的管子或瓶子。

  5、不在儀器周圍放置危險品。

  6、不使用易燃易爆物。

  【雜交爐】

  操作步驟

  1、設(shè)置溫度

  按一下up或down鍵,顯示屏將由亮到暗開始閃爍,此時顯示的是上次設(shè)置的溫度。如需改變,則通過up或down鍵來上調(diào)或下調(diào)。停按5秒鐘后,數(shù)字停止閃爍,并開始顯示爐內(nèi)溫度。(第一次使用前需要至少24小時來穩(wěn)定加熱器。)

  2、校準

  需要校準顯示溫度與實際溫度是否一致。將一枝標準溫度計置于樣品附近,穩(wěn)定1小時后,比較2者的數(shù)值是否一致。

  如需校準,則同時按住up和down鍵直到顯示屏上數(shù)字中前后2個小數(shù)點開始閃動,然后用up或down鍵來改變數(shù)值,使其與溫度計的參考數(shù)值一致。再次穩(wěn)定加熱器。

  3、轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)

  轉(zhuǎn)動開關(guān)有3個位置,上位表示開,其轉(zhuǎn)速可在0~15 RPM之間調(diào)節(jié);中位表示關(guān);下位表示短時間轉(zhuǎn)動,按住才轉(zhuǎn)動松開即關(guān)。

  維護

  使用前后觀察系統(tǒng)是否清潔,如果不是,則需要清洗。

  1、顱腔

  用肥皂和水進行清洗,然后干燥。如有污染,則用適當?shù)南緞┣逑,注意不要用含氯漂白劑,否則容易造成損壞。

  2、接水盤和旋轉(zhuǎn)架

  先取下來,然后用同樣的溶液進行清洗。

  【干膠儀】

  操作步驟

  1.將干膠儀的排水管連接到真空泵上,閥門旋到開的位置。

  2.打開電源開關(guān)。

  3.選擇干膠CYCLE:

  a.按CYCLE健兩次;

  b.當燈在閃動狀態(tài)時,按RAISE或LOWER健選擇干膠CYCLE。

  4. 選擇循環(huán)溫度:

  a.按TEMP鍵兩次;

  b. 當燈在閃動狀態(tài)時,按RAISE或LOWER健選擇溫度。

  5.選擇循環(huán)時間:

  a.按TIME鍵兩次;

  b. 當燈在閃動狀態(tài)時,按RAISE或LOWER健選擇時間。

  6.將膠放在干膠儀里(將膠放在透明的保護蓋的下面,在膠的表面覆蓋一層塑料薄膜)。

  7.打開真空泵。

  8.按START鍵開始干膠程序。

  9.干膠程序完成后,打開透明的保護蓋,閥門旋到開的位置,然后關(guān)掉真空泵。

  干膠時間的選擇

  膠的濃度 膠的厚度 80℃所需時間

  3%至20% 0.375mm        30min

  3%至20% 0.5mm 40min

  3%至10% 0.75mm 40min到60min

  10%至20% 0.75mm 60min到120min

  3%至10% 1.5mm 45min到60min

  10%至20% 1.5mm 60min到120min

  3%至10% 3mm 60min到120min

  10%至20% 3mm 120min到180min

  【Leica熒光顯微鏡】

  簡要操作步驟

  1.打開12V/100W Leica的電源開關(guān),至少預(yù)熱10分鐘。

  2.打開顯微鏡的電源開關(guān)。

  3.放置樣品,調(diào)好放大倍數(shù)、焦距和視野。

  4.移動light stop至 。

  5.滑動filter block至相應(yīng)光路。

  6.將光線調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)到最小。

  7.鏡下觀察樣品的熒光染色情況。

  8.如果樣品有微紅色背景,可以將BG 38 filter移動至 ,以消除背景色的干擾。

  9.如要拍照,需將相機與顯微鏡連接,將顯微鏡上的拉桿拉出,這時在相機上可直接觀察樣品的熒光染色情況,并拍照保存。

  10.結(jié)束后,關(guān)掉顯微鏡和12V/100W Leica的電源開關(guān)。

  【PCR儀】

  操作步驟:

  -RUN ENTER

  PROGRAM PROGRAM

  1、開機:打開開關(guān),視窗上顯示“SELF TEST”,顯示10秒中后,顯示RUN-ENTER菜單:準備執(zhí)行程序。

  2、放入樣本管,關(guān)緊蓋子。

  3、如果要運行已經(jīng)編好的程序,則直接按《Proceed》,用箭頭鍵選擇已儲存的程序,按《Proceed》,則屏幕顯示:

  -ENABLE DISABLE

  heated lid

  按《Proceed》選擇ENABLE,則開始執(zhí)行程序。

  -NEW LIST

  EDIT DELET

  4、如果要輸入新的程序,則在RUN-ENTER菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM,按《Proceed》,屏幕顯示

  Step 1 _TEMP

  GOTO Opiton End

  按《Proceed》,1)選擇NEW,命名新的程序,最多8個字母,輸入后按《Proceed》確認(如何輸入字母、數(shù)字)。

  2)輸入程序步驟:名字輸入后,顯示

  按《Proceed》則可以輸入溫度(0~100℃),按《Proceed》確認后,則可以輸入孵育時間,用《Select》鍵移動光標,輸入數(shù)字,完成后按《Proceed》確認,跳到下一步,輸入方式同上。

  3)選擇GOTO,輸入循環(huán)步驟時鏈接到第幾步(循環(huán)數(shù)最多可達9999次)(為實際循環(huán)數(shù)-1)。

  Step extend

  Increment slope

  4) 選擇option,再選擇increment,按《Proceed》確認,輸入初始的溫度,確認后輸入時間,按《Proceed》確認,然后輸入每個循環(huán)增加或減少的溫度,增加用正值,減少用負值(-0.1℃~6℃),按《Proceed》確認。

  選擇extend, 按《Proceed》確認,輸入每個循環(huán)增加或減少的時間(-60~60秒),按《Proceed》確認。

  選擇slop(指溫度上升或下降的速率),輸入溫度的改變值(-0.1~1.5℃)按《Proceed》確認,然后輸入加熱或致冷的速度,按《Proceed》確認。

  4)選擇End,輸入結(jié)束步驟。

  5、輸入完成的程序后,到RUN-ENTER菜單,選擇新程序,開始運行。

  6、其它:用《pause》可以暫停一個運行的程序,再按一次繼續(xù)程序。

  用《stop》或《Cancel》可停止運行的程序。

  編輯程序:

  1、可以用《Cancel》鍵刪除輸錯的值,輸入新的值后按《Proceed》確認。

  2、對于未輸完的程序,要先輸入END,按《Proceed》將程序儲存后才能刪除。

  3、刪除已經(jīng)儲存的程序:從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM,按《Proceed》,顯示主菜單,選擇DELET,用《Select》選擇刪除。

  4、查看程序的步驟:在主菜單上選擇LIST,按《Proceed》,用《Select》將選擇名稱,再按《Proceed》,顯示程序的第一步,用《Select》鍵向前、向后翻頁查看,此時不能改變程序的值。

  編輯已有的程序:

  1、從RUN-ENTER菜單中選擇RUN-PROGRAM,按《Proceed》,顯示主菜單,選擇EDIT,按《Proceed》確認,用《Select》鍵選擇要編輯的程序,按《Proceed》顯示程序的第一步。

  2、用《Select》鍵將光標移到要改變的溫度或循環(huán)的值上,鍵入新值,按《Proceed》確認,按《Cancel》刪除鍵入的值,出現(xiàn)空格,鍵入新值后確認。

  注:一旦值被改變或刪除,原來的值不能恢復(fù),必須重新鍵入。

  3、編輯時間值:必須重新鍵入小時、分鐘、秒,按《Proceed》。

  如何設(shè)置一個PCR體系:

  一般分為8步:

  1、預(yù)變性:可用94~95℃,2~10min,一般用5min。

  2、變性:一般用94℃,30s~2min,一般45s~1min。

  3、退火:溫度自定,30s~2min。

  4、延伸:70~75℃,一般72℃,對于〈2kb,<1min;>2kb,每增加1kb加1min。

  5、循環(huán)數(shù):一般25~35個循環(huán)。

  6、最終延伸:72℃,5~15min。

  7、保存:10℃,時間設(shè)為0。

  8、END。